Si perfeziona con maestri internazionali come Dario Fo, Eugenio Barba e Jerzy Grotowski al Teatro Ateneo, approfondisce le tecniche di teatro corporeo con Lindsay Kemp e completa la propria preparazione al Theatre du Campagnol in Francia e alla Wuppertal Tanztheater di Pina Bausch.
Tra i film più significativi della carriera di Paola Maffioletti spiccano Loro, diretto da Paolo Sorrentino, e Boris: Il Film. Recita inoltre in Una storia nera di Leonardo D’Agostini, In viaggio con Adele di Alessandro Capitani e Take the Money and Run .
Sul piccolo schermo, ha preso parte a produzioni di successo come La legge di Lidia Poët (terza stagione), Noi, Lolita Lobosco , Don Matteo 9 e I Cesaroni.
Nel 1992 recita in uno spot per Banca di Roma diretto da Federico Fellini.
Oltre alla recitazione, Paola Maffioletti pratica la danza a livello professionale e il canto, con studi presso la Scuola di Danza Mimma Testa, il Centro Internazionale Danza e la Greenwich Dance Agency di Londra.